iCIEF7) 、IEF8)、CEX9)、HPLC
注： 1) High Performance Liquid Chromatography；2) Sodium Dodecyl Sulfate Polyacrylamide Gel Electrophoresis；3) Enzyme-linked Immunosorbent Assay；4) Protein A Affinity Chromatography；5) Protein Immunoblot；6) Size Exclusion Chromatography；7) Imaged Capillary Isoelectric Focusing; 8) Isoelectric Focusing；9) Cation Exchange Chromatography；
1.1 流加教育办法及优化政策
今朝上市的重组抗体中绝大普遍（如：EnbrelTM、HerceptinTM、RituxanTM、SynagisTM）是选择流加（Fed batch）教育工艺损耗，这主要因为与之配套的生物反应器（搅拌罐、气鼓鼓升罐等）建造幼稚，可线形夸大（最大至20,000L），操作简捷等缘由。不过，流加教育历程中会呈现营养物质消费、代谢废料积存，和产物质量没有牢靠等课题。所以，流加教育工艺的优化主要分散正在根底教育基、流加教育基和流加政策上[2]2][9] [10] [11]，其优化的准则是根据细胞的代谢特征妄图补料教育基，用于弥补易耗身分，升高副产品积存[12] 明天2下午[13]。
1.2 贯注教育办法及优化政策
贯注教育模式（Prefusion）下，反应器多少乎可完结"恒化器"教育动机，细胞密度、蛋白产量可较流加模式进步数倍[14] [15]。不过贯注教育细胞截留需寻常安设，工艺夸大生存难度，其家产化利用的经济性尚存争议[16] [17]。今朝，只要小量抗体（如：ReoProTM、RemicadeTM、SimulectTM、SimponiTM、StelaraTM等）及易降解的重组蛋白（凝血因子）等利用该工艺。贯注教育工艺优化，主要分散正在贯注教育基及灌流速率上[18]。 其优化准则是经过升高灌流速率，进步教育基的运用率以及产品的容积产率。
其余，掌握流加贯注工艺（controlled fed prefusion）同时拥有流加工艺以及贯注工艺的优点。该工艺对于易孕育代谢废料的营养施行限制性流加。根据细胞摄氧量的改变，流加氨基酸以满意高密度细胞的营养须要。[19]
用于进步重组抗体表达水平的方式
动物细胞的高密度教育，有赖于适合的教育基和恰当的反应器境况。所以，旨正在进步重组抗体表达的工艺开垦，主要分散正在"特性化教育基"的开垦和历程参数的优化上。上述争论常常须要借助袖珍化反应器，如传统的三角瓶、孔板，转管（spintube）等。连年，新式主动化小领域反应器（BioLectorTM、SimCellTM、Micro-24TM,ambrTM等）[20]不停呈现，此类装置没有仅能摹拟反应器的pH、DO、教育基流加等掌握条件，而且恐怕完结考察条件的通量挑选，大大加快了细胞教育工艺开垦的里程。如： SimcellTM可同时利用180个微型反应器（650ul）施行工艺条件挑选[21]。M后天3晚上icro-24TM可正在孔板领域（5ml）对于3L反应器pH，DO，温度等分歧条件施行摹拟[22]。
2.1教育基优化方式
早期的动物细胞教育基中常含有胎牛血清或小牛血清。连年工业用教育基的开垦趋势，一经转向无蛋白 （PF）、无动物源（ADCF），以至化学身分显着教育基（CD）[23]。其余，抗体损耗企业正在教育基开垦历程中，还应充分今天1早上思虑教育基老本（常常2.2 两相教育与代谢转化
绝大普遍重组蛋白的损耗选择"两相教育工艺"（biphasic culture process），该工艺中"繁殖期"与"损耗期"选择全面分歧的掌握政策，如降温、调治pH，改革流加政策等（见表2）。此工艺中细胞的代谢状态产生分明的改变，称之为"代谢转化征象"（metabolic shift）即：繁殖期细胞代谢繁盛，孕育大度乳酸，而投入损耗期后，细胞繁殖受到克制，乳酸产量随之变小，直至消费。
2.3 匆匆进异源蛋白表达的小分子物质
某些小分子化合物也许经过改革细胞周期，匆匆进重组蛋白的表达（见表2）。直接正在教育基中推广这种物质，是进步想法蛋白产率的轻松方式。此类物质中丁酸钠（NaBu）以及二甲基亚砜（DMSO）利用至多。
表2 细胞教育中用于进步重组抗体表达的方式以及物质
Table 2 The summary of methods and compositions used for improving recombinant antibody expression in cell culture process