绪言
银屑病关键炎（PsA）与许多免疫细胞群的病发体制相关，今朝已知PsA与CD8+T细胞（尤为是孕育IL-17）相关。本篇争论经过质谱流式细胞术（CyTOF）贯串转录组学本领，测量PsA、SF以及血白细胞的高维数据集，并审定炎性蛋白（骨桥蛋白以及CCL2）。无一切体外刺激条件下定量分解SF蛋白，以决定髓源性介质正在PsA病发体制中的影响。
2021年12月,由英国牛津大学纳菲尔德骨科、风湿病学以及肌肉骨骼学院Nicole Yager、Paul Bowness教讲课题组正在国际风湿病顶级期刊Annals Of The Rheumatic Diseases期刊（IF:27.973）宣布了题为“Ex vivo mass cytometry analysis reveals a profound myeloid proinflammatory signature in psoriatic arthritis synovial fluid”的争论结果，经过质谱流式细胞术以及转录组学争论方式，发明了骨桥蛋白以及CCL2的性格，商量了PsA的炎症机理，描画了PsA SF以及血液的分析细胞图谱。为PsA诊疗以及调节供给了外貌按照。
争论思路
争论方式
1、测验分组/争论质料
（1）测验组：11名（6名男性，5名少女性，未采用生物DMARDS或类固醇调节的陆续患者，4名甲氨蝶呤调节的患者）收罗血液以及SF；个中3名患者施行PCR阵列评估，3名患者施行scRNA测序，其它3名患者施行靶向SF以及血浆蛋白分解
（2）比照组：15名强健者（10名男性，5名少女性）收罗血液
2、本领门路
2.1细胞因子染色以及分解:Maxpar、ConsensusClusterPlus以及FlowSOM法
2.2 PCR阵列：RNeasy Micro kit（Qiagen）、定制384基因阵列（RT2）、ΔΔCt方式算计SF血样
2.3 定量骨桥蛋白：LEGENDplex、人骨桥蛋白ELISA
2.4 scRNA测序分解：Seurat判别分解聚髓细胞簇
3、统计分解
Benjamini-Hochberg、Wilcox、BioLegend
争论了局
1. 与PsA血比拟，PsA SF再现尤其性髓细胞量昭著推广
对于11名PsA患者的SF以及血液施行细胞因子分解，经过主身分分解（PCA）可昭著识别PsA、SF样本与血液（图1）。无偏聚类算法FlowSOM查看到细胞间的分明分裂。正在PsA SF中，中间体单核细胞、巨噬细胞、cDC1、cDC2、CD206+cDC2、pDC、记忆CD8 T细胞、记忆CD4T细胞以及CD56bright NK细胞昭著推广；非典范单核细胞、嗜碱性粒细胞、初始CD8 T细胞、初始 CD4 T细胞、B细胞、CD56dim CD16+NK细胞以及NKT细胞则昭著削减（图2）。
图1 | PsA滑液（SF）、血液的测验过程以及主身分分解
图2 | PsA SF CyTOF分解细胞组群符合性
11例PsA患者中有4例服用甲氨蝶呤，对于单核细胞或巨噬细胞没有作用，而cDc1、CD206+cDC2及CD56dim CD16+NK细胞推广，激活的记忆性CD8 T细胞削减。与血液比拟，甲氨蝶呤并没有作用PsA SF的总体上升/升高。将强健血液与PsA血液施行较为，发明PsA血液中pDC以及MAIT细胞的频次升高(弥补图S1)。
2. PsA SF中扩充多个记忆T细胞亚群
与血液比拟，PsA SF中PD1hi记忆CD4 T细胞，PD1mid记忆CD4 T细胞、CD25hi记忆CD4 T细胞、CD49a+记忆CD8 T细胞群昭著推广，并选择FlowSOM对于细胞群聚类分解（弥补图S2）。
3. PsA SF髓样细胞正在体外孵育时自觉释放匆匆炎蛋白
体外孵育SF以及PsA患者的血液，并将匹配的样本施行较为。除了18种细胞皮相谱系符号物，还席卷18种细胞内符号物以检测细胞因子、趋化因子以及其他渗出蛋白，席卷IFNg、IL-4、IL-10、IL-17以及IL-21（主要由T细胞渗出）和IL-8、CCL2、CXCL10、骨激活素以及骨桥蛋白（主要为髓样细胞）。选择FlowSOM对于细胞群施行聚类分解，正在典范单核细胞、中间单核细胞以及巨噬细胞的SF中，骨桥蛋白、CCL2以及IL-8正在T6时均昭著推广。PsA血液中，因为中间单核细胞太少，没法分解单核细胞（图3A、弥补图S3A-3B、S6以及弥补表S3）。
PsA SF中的 CD11c+CD14 + CD123- 细胞正在6小时内孕育了骨桥蛋白、CCL2以及IL-8。但正在血液中仅检测到少许骨桥蛋白，SF单核细胞中CCL2以及IL-8昭著高于血单核细胞（图3C-D），SF单核细胞中孕育较高的CXCL10以及骨化素（弥补图S7）。T细胞因子正在6小时代间释放的信息发明，SF MAIT细胞中IL-10的表达推广了95%（弥补图S5）。选用PMA /离子型霉素算作阴性比照，再现了T细胞的召回才略以及孕育细胞因子的才略（弥补图S8）。
图3 | PsA SF单核细胞/巨噬细胞正在离体6小时内自觉孕育骨桥蛋白、CCL2以及IL-8（CXCL8）
4. 与匹配的PBMCs比拟，SPP1以及CCL2正在SF T细胞以及单核细胞的基因表达中均上调
从匹配的PBMC以及SF样本中提取CD14 +细胞、记忆CD8 T细胞以及记忆CD4 T细胞，三种细胞类别与血液比拟，发明SF平衡的基因表达上调（图4B）。正在SF CD14 +细胞中，骨桥蛋白基因SPP1是上调最高的基因。CD14+细胞中CCL2以及CXCL10同时上调，但CXCL8 （IL-8基因）未上调。CyTOF数据分散，即使OLR1以及TNF昭著上调，但相映的蛋白没有昭著推广（图4C）。
PsA PBMCs中的基因表达与比照样本比对于（弥补图S9A）。SPP1以及CCL2仅正在PsA SF与PsA血中上调，而正在PsA血中以及强健血中无昭著分裂。与强健血液比拟，PsA SF中CXCL10 IL上调，但正在PsA血中下调（弥补图S9B）。与血浆比拟，SF中骨桥蛋白、CCL2以及IL-8均富集（图4D）。对于血液以及SF的单核/巨噬细胞簇，施行分裂基因表达分解，发明SPP1上调至多。SF中的SPP1以及CCL2均正在多个细胞群中表达，但表达水平相对于较低。CyTOF数据中，SF的单核/巨噬细胞群体的细胞因子、趋化因子基因上调最高（图5）。
图4 | 分解PsA SF CD14+细胞、记忆CD8+T细胞以及记忆CD4+T细胞基因
图5 | PsA SFMC的scRNA测序数据中，单核细胞/巨噬细胞中骨桥蛋白以及CCL2基因高度上调
相干议论
经过基因水平阐明，正在新分类的PsA SF CD14单核细胞/巨噬细胞以及scRNAseq数据分散的单核细胞/巨噬细胞的SPP1（骨桥蛋白的基因）上调最高。SF T细胞中，CyTOF没有检测到骨桥蛋白，而骨桥SF CD4 T细胞中也没有CXCL13。PsA单核细胞/巨噬细胞孕育了IL-8（CXCL8），但血液中的含量高于SF，阐明滑膜构造细胞或中性粒细胞大概是PsA的主要起因。
争论结论
经过质谱流式细胞术（CyTOF）贯串转录组学分解本领，发明正在没有一切体外刺激的状况下，典范单核细胞、中间单核细胞以及巨噬细胞会自觉孕育大度的匆匆炎介质骨桥蛋白以及CCL2。基因表达分解PsA 单核细胞/巨噬细胞，发明基因昭著上调的骨桥蛋白以及CCL2，且这两种蛋白质正在PsA SF中也昭著上升。天生的PsA SF以及血液的分析细胞图谱，露出了PsA 中拥有潜伏致病性以及调节主要性的枢纽骨髓匆匆炎模块。
小鹿引荐
质谱流式细胞术贯串组学分解本领露出了银屑病关键炎滑液中的骨髓匆匆炎性格，天生的PsA SF、血液白细胞高维数据图谱，体外判别了淋巴以及骨髓细胞因子。争论分解，单核细胞/巨噬细胞的克制疗法，是引发PsA炎症的因素之一；骨桥蛋白以及CCL2两种蛋白对于PsA诊疗以及调节有特定影响。
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